1.本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种异丙基托品醇中有关物质的检测方法。
背景技术：2.异丙托溴铵(ipratropium bromide)，其化学名为(1r,3r,5s,8r)-3-[[(2rs)-3-羟基-2-苯基丙酰基]氧基]-8-甲基-8-异丙基-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷溴化物，分子式为c
20h30
brno3·
h2o，分子量为430.38。异丙托溴铵为m受体阻断剂，属于阿托品第四代衍生物，是一种强效高选择性抗胆碱药。
[0003]
异丙基托品醇是合成异丙托溴铵的重要起始物料，因此，异丙基托品醇的质量控制对合成异丙托溴铵有很大的影响。在异丙基托品醇合成的过程中，不可避免的会出现有关物质2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮，上述有关物质均有可能成为合成异丙托溴铵时的杂质，因此，亟需研发一种可以对异丙基托品醇的质量进行有效控制的检测方法，进而保证对异丙托溴铵质量的效控制，以完善行业标准。
技术实现要素：[0004]
鉴于此，本发明提供一种异丙基托品醇中有关物质的检测方法，专属性强、灵敏度高，并具有优异的准确度和线性关系，能够满足异丙基托品醇中2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的检测要求。
[0005]
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
[0006]
一种异丙基托品醇中有关物质的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
[0007]
步骤一、配制供试品溶液和对照品溶液：
[0008]
供试品溶液的配制：取异丙基托品醇样品，用溶剂配制成供试品溶液；
[0009]
对照品溶液的配制：取2,5-二甲氧基四氢呋喃对照品和异丙基托品酮对照品，用溶剂配制成对照品溶液；
[0010]
步骤二、采用气相色谱对所述供试品溶液和对照品溶液进行检测，所述气相色谱的色谱条件为：
[0011]
采用以硝基对苯二甲酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱；进样口温度为225℃～235℃；程序升温为：起始温度为78℃～82℃，维持1min～5min，以9℃/min～11℃/min的速率升温至225℃～235℃，维持3min～8min；采用氢火焰离子化检测器，所述检测器温度为245℃～255℃。
[0012]
相对于现有技术，本技术提供的异丙基托品醇中有关物质的检测方法，具有以下优势：
[0013]
本技术提供的异丙基托品醇中有关物质的检测方法，实现了对异丙基托品醇原料药中杂质2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的定量和定性分析，该方法专属性强，灵敏度高，满足异丙基托品醇原料药中2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的检测要求，
而且，其线性关系良好，重复性高，标准曲线的线性范围内的相关系数都大于0.99；此外，该检测方法还具有分析时间快，整个操作过程可靠、可控，适于实际应用和推广，具有广阔的应用前景。
[0014]
可选的，所述程序升温为：起始温度为80℃，维持3min，以10℃/min的速率升温至230℃，维持5min。
[0015]
升温程序是影响气相色谱柱性能的重要因素，初始温度、升温速率和最终温度决定着各组分的洗脱能力，因此本技术优选上述初始温度、升温速率和最终温度，能够将杂质2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮从异丙基托品醇原料药中快速的分离出来，且各组分还具有优异的分离度。
[0016]
可选的，所述进样口温度为230℃。
[0017]
可选的，所述检测器温度为250℃。
[0018]
优选的进样口温度和检测器温度有利于将2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮从主成分异丙基托品醇中分离出来，且保证峰型较好，分离度较高。
[0019]
可选的，载气为氮气，分流比为1～2:1。
[0020]
进一步可选的，分流比为1:1。
[0021]
优选的分流比使得色谱峰的峰形较好，避免峰变形拖尾等情况的发生。
[0022]
可选的，流速为4.9ml/min～5.1ml/min，进样体积为0.5μl。
[0023]
进一步可选的，流速为5ml/min。
[0024]
可选的，所述毛细管柱的型号为hp-ffap。
[0025]
可选的，所述毛细管柱的规格为30m
×
0.53mm
×
1.0μm。
[0026]
不同的色谱柱对化合物的保留性能差别较大，因此本技术采用hp-ffap毛细管柱，规格为30m
×
0.53mm
×
1.0μm，能够实现目标物的快速有效分离，且峰形较好。
[0027]
可选的，所述溶剂为n,n-二甲基甲酰胺。
[0028]
优选的溶剂对2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的检测不具有干扰性，保证检测结果的准确性。
附图说明
[0029]
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]
图1是本发明实施例1提供的空白溶液的气相色谱图；
[0031]
图2是本发明实施例1提供的对照品溶液的气相色谱图；
[0032]
图3是本发明实施例1提供的供试品溶液的气相色谱图；
[0033]
图4是本发明实施例1提供的加标溶液的气相色谱图；
[0034]
图5是本发明对比例1提供的对照品溶液的气相色谱图；
[0035]
图6是本发明对比例2提供的对照品溶液气相色谱图；
[0036]
图7是本发明对比例2提供的供试品溶液气相色谱图。
具体实施方式
[0037]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0038]
实施例1
[0039]
本实施例提供一种异丙基托品醇中有关物质的检测方法，包括以下步骤：
[0040]
步骤一、配制空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和加标溶液：
[0041]
空白溶液：以n,n-二甲基甲酰胺作为空白溶液；
[0042]
供试品溶液的配制：取异丙基托品醇样品适量，精密称定，用n,n-二甲基甲酰胺配制成浓度为30mg/ml的供试品溶液；
[0043]
对照品溶液的配制：取2,5-二甲氧基四氢呋喃对照品和异丙基托品酮对照品适量，精密称定，用n,n-二甲基甲酰胺配制成对照品溶液，其中所述对照品溶液中，2,5-二甲氧基四氢呋喃的浓度为150μg/ml，异丙基托品酮的浓度为30μg/ml；
[0044]
加标溶液的配制：取异丙基托品醇样品、2,5-二甲氧基四氢呋喃、异丙基托品酮适量，用n,n-二甲基甲酰胺配制成浓度分别为30mg/ml、150μg/ml和30μg/ml的混合溶液。
[0045]
步骤二、采用气相色谱对所述空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和加标溶液进行检测，色谱图如图1～4所示；其中，所述气相色谱的色谱条件为：
[0046]
采用型号为hp-ffap，规格为30m
×
0.53mm
×
1.0μm，以硝基对苯二甲酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱；进样口温度为230℃；程序升温为：起始温度为80℃，维持3min，以10℃/min的速率升温至230℃，维持5min；采用氢火焰离子化检测器，所述检测器温度为250℃；氮气为载气，分流比为1:1，流速5.0ml/min，进样体积为0.5μl。
[0047]
从图1-图4中可以看出，n,n-二甲基甲酰胺溶剂和异丙基托品醇对杂质2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的检测无干扰，保证检测结果的准确性。
[0048]
从图2中可以看出，在保留时间4.579min处出现了2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体1的色谱峰，在保留时间5.348min处出现了2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体2的色谱峰，在保留时间7.255min处出现了n,n-二甲基甲酰胺的色谱峰，在保留时间12.723min处出现了异丙基托品酮的色谱峰，且各组分分离度良好。
[0049]
从图3中可以看出，2,5-二甲氧基四氢呋喃未检出，在保留时间7.237min处出现了n,n-二甲基甲酰胺的色谱峰，在保留时间12.723min处出现了异丙基托品酮的色谱峰，在保留时间13.969min处出现了异丙基托品醇的色谱峰，且各组分分离度良好。
[0050]
从图4中可以看出，在保留时间4.578min处出现了2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体1的色谱峰，在保留时间5.348min处出现了2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体2的色谱峰，在保留时间7.238min处出现了n,n-二甲基甲酰胺的色谱峰，在保留时间12.725min处出现了异丙基托品酮的色谱峰，在保留时间13.967min处出现了异丙基托品醇的色谱峰，且各色谱峰均分离度良好。
[0051]
上述加标溶液中各组分的分离度检测结果如下表1所示，从表1中可以看出，各成分间分离度良好，由此说明本技术提供的异丙基托品醇中有关物质的检测方法专属性良好。
[0052]
表1 分离度检测结果
[0053][0054][0055]
实施例2检测限和定量限
[0056]
检测限：将实施例1制备的对照品溶液采用n,n-二甲基甲酰胺逐级定量稀释，然后采用气相色谱进行检测，气相色谱的具体条件如实施例1所述，记录谱图，按信噪比不低于3:1，得到检测限，结果见表2。
[0057]
定量限：将实施例1制备的对照品溶液采用n,n-二甲基甲酰胺逐级定量稀释，然后采用气相色谱进行检测，气相色谱的具体条件如实施例1所述，记录谱图，按信噪比不低于10:1作为定量限，结果见表2。
[0058]
表2 定量限和检测限检测结果
[0059][0060]
将定量限溶液重复测定6次，分别记录其峰面积，结果如下表3所示，从表3中可以看出，峰面积的rsd最大为4.27％，表明本方案提供的检测方法，定量限重复性良好。
[0061]
表3 定量限重复性检测结果
[0062][0063]
实施例3线性
[0064]
分别取2,5-二甲氧基四氢呋喃、异丙基托品酮和异丙基托品醇适量，用n,n-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成系列浓度溶液，采用气相色谱进行检测，气相色谱条件具体如实施例1所示，记录谱图，以浓度(μg/ml)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并
计算回归方程，结果见表4。从表4中可以看出，2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体1在1.2341μg/ml～123.4094g/ml的浓度范围内线性关系良好，2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体2在1.8511μg/ml～185.1142μg/ml的浓度范围内线性关系良好，异丙基托品酮在1.4800μg/ml～59.2000μg/ml的浓度范围内线性关系良好，异丙基托品醇在0.3628μg/ml～120.9201μg/ml的浓度范围内线性关系良好。
[0065]
表4 线性试验结果
[0066][0067][0068]
实施例4回收率
[0069]
分别取2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮各适量，精密称定，用n,n-二甲基甲酰胺制成10倍限度浓度的混合溶液，作为对照品贮备溶液；取异丙基托品醇样品约300mg，精密称定，置10ml量瓶中，平行制备9份，再分别精密加入0.4ml、0.8ml和1.0ml对照品贮备溶液，用n,n-二甲基甲酰胺定容至刻度，每个浓度平行3份，作为回收率供试品溶液，采用气相色谱进行检测，气相色谱条件具体如实施例1，结果如表5～表7所示。
[0070]
表5 2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体1的回收率检测结果
[0071][0072]
表6 2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体2的回收率检测结果
[0073][0074][0075]
表7 异丙基托品酮的回收率检测结果
[0076][0077]
从表5～表7中可以看出，2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的回收率在99％～108％之间，rsd最大值为2.14％，由此说明，本技术提供的检测方法准确度良好。
[0078]
实施例5重复性
[0079]
取同一批样品，按照实施例1中供试品溶液的配制方法制备6份供试品溶液，采用气相色谱进行检测，气相色谱的具体条件如实施例1所述，结果如表8所示。从表8中可以看出，6份供试品溶液的检测结果基本一致，表明本技术提供的检测方法重复性良好。
[0080]
表8 重复性检测结果
[0081][0082][0083]
实施例6溶液稳定性
[0084]
取实施例1制备的对照品溶液，分别放置0h、2h、4h、8h后，采用气相色谱进行检测，气相色谱的具体条件如实施例1所述，记录其峰面积，计算其rsd(％)，试验结果如下表9所示。从表9中可以看出，对照品溶液在室温条件下，放置8小时，2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的rsd％均小于5％，表明上述对照品溶液的稳定性良好。
[0085]
表9 溶液稳定性检测结果
[0086][0087]
实施例7耐用性
[0088]
将实施例1制备的对照品溶液采用气相色谱进行检测，气相色谱的具体条件如实施例1所述，并记录其分离度。
[0089]
初始温度微调，初始温度分别调整为78℃和82℃，其余检测条件与实施例1一致，记录其分离度，结果如表10所示。
[0090]
表10 不同初始温度的分离度
[0091][0092]
微调流速微调，流速分别调整为4.9ml/min和5.1ml/min，其余检测条件与实施例1一致，记录其分离度，结果如表11所示。
[0093]
表11 不同流速的分离度
[0094][0095]
升温速率微调，升温速率分别调整为9℃/min和11℃/min，其余检测条件与实施例1一致，记录其分离度，结果如表12所示。
[0096]
表12 不同升温速率的分离度
[0097][0098]
进样口温度微调，进样口温度分别调整为225℃和235℃，其余检测条件与实施例1一致，记录其分离度，结果如表13所示。
[0099]
表13 不同进样口温度的分离度
[0100][0101]
检测器温度微调，检测器温度分别调整为245℃和255℃，其余检测条件与实施例1一致，记录其分离度，结果如表14所示。
[0102]
表14 不同检测器温度分离度
[0103][0104]
从表10～表14中可以看出，微调色谱条件对2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮的检测无影响，各成分分离度均符合要求，表明本发明提供的检测方法耐用性良好。
[0105]
为了更好的说明本发明的技术方案，下面还通过对比例和本发明的实施例做进一步的对比。
[0106]
对比例1
[0107]
本对比例提供一种异丙基托品醇中有关物质的检测方法，包括以下步骤：
[0108]
步骤一、配制对照品溶液：
[0109]
上述对照品溶液的配制方法如实施例1中所述，不再赘述；
[0110]
步骤二、采用气相色谱对上述对照品溶液进行检测，色谱图如图5所示；其中，所述气相色谱的色谱条件为：
[0111]
采用型号为hp-ffap，规格为30m
×
0.53mm
×
1.0μm，以硝基对苯二甲酸改性的聚乙二醇为固定液的毛细管柱；进样口温度为160℃；程序升温为：起始温度为80℃，维持3min，以10℃/min的速率升温至160℃，维持5min；采用氢火焰离子化检测器，所述检测器温度为180℃；氮气为载气，分流比为1:1，流速5.0ml/min，进样体积为0.5μl。
[0112]
从图5中可以看出，采用上述的进口温度以及检测其温度，只检测出2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体1和2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体2，异丙基托品酮未检出，由此说明，升温程序是影响气相色谱柱性能的关键因素，初始温度、最终温度以及检测器温度决定着各组分的洗脱能力，因此本技术优选的初始温度、最终温度以及检测器温度，能够将杂质2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮从异丙基托品醇原料药中快速的分离出来，且各组分还具有优异的分离度。
[0113]
对比例2
[0114]
本对比例提供一种异丙基托品醇中有关物质的检测方法，包括以下步骤：
[0115]
步骤一、配制对照品溶液和供试品溶液：
[0116]
上述对照品溶液和供试品溶液的配制方法如实施例1中所述，不再赘述；
[0117]
步骤二、采用气相色谱对上述对照品溶液和供试品溶液进行检测，色谱图如图6和图7所示；其中，所述气相色谱的色谱条件为：
[0118]
采用型号为hp-innowax，规格为30m
×
0.53mm
×
1.0μm，以交联键合聚乙二醇为固定液的毛细管柱；进样口温度为230℃；程序升温为：起始温度为80℃，维持3min，以10℃/min的速率升温至230℃，维持5min；采用氢火焰离子化检测器，所述检测器温度为250℃；氮气为载气，分流比为1:1，流速5.0ml/min，进样体积为0.5μl。
[0119]
从图6中可以看出，在保留时间8.883min处出现了2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体1的色谱峰；在保留时间9.237min处出现了2,5-二甲氧基四氢呋喃异构体2的色谱峰；在保留时间15.243min处出现的了异丙基托品酮的色谱峰，该色谱峰峰形较差，不满足检测要求。从图7中可以看出，位于16.636min处的异丙基托品醇的色谱峰和位于16.867min处的异丙基托品酮的色谱峰没有分开。由此可知，采用对比例2提供的检测方法并不能将杂质2,5-二甲氧基四氢呋喃和异丙基托品酮从异丙基托品醇原料药中分离出来。
[0120]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
