本申请涉及分子探针，具体而言，涉及一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针及其制备方法和应用。
背景技术：
1、局部黏着斑激酶(focal adhesion kinase,fak)是一种非受体细胞内酪氨酸激酶，其激酶活性和支架功能在癌细胞的黏附、存活、代谢、增殖、迁移和肿瘤微环境中发挥着重要作用。
2、fak的过表达及激活主要在原发性癌及转移性癌中被发现，如原发性肝癌、结肠癌、卵巢癌、乳腺癌等多种不同人源癌细胞中均有fak蛋白的过表达，研究表明，fak是某些癌症中免疫应答的关键媒介，抑制fak的活性可能会触发免疫介导的肿瘤消失，因此，fak被认为是一种具有潜力的新型抗癌药物靶标。
3、鉴于在癌症细胞中fak的过表达，当前已有许多直接作用于fak的fak抑制剂，这些fak抑制剂能够降低癌细胞的活力，阻断肿瘤生长。本申请基于fak抑制剂设计了一种分子探针，以期利用该分子探针实现对fak抑制剂的筛选以及对fak靶标蛋白的鉴定。
技术实现思路
1、为了对fak抑制剂的筛选以及对fak靶标蛋白的鉴定，本申请提供了一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针及其制备方法和应用。
2、本申请的实施例是这样实现的：
3、本申请实施例提供一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针，具有如下所示结构：
4、
5、本申请还提供一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的制备方法，用于制备所述的一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针，包括以下步骤：
6、将2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶溶于第一有机溶剂中，加入三乙胺和n-(3-(氨基甲基)吡啶-2-基)-n-甲基甲烷磺酰胺，在第一预设反应条件下进行反应，反应结束后，得到第一反应液；
7、对第一反应液进行后处理，纯化后得到化合物i；
8、向所述化合物i中加入二氧六环、对苯二胺和n,n-二异丙基乙胺，在第二预设反应条件下进行反应，反应结束后，得到第二反应液；
9、对第二反应液进行后处理，纯化后得到化合物ii；
10、将所述化合物ii溶于第二有机溶剂中，加入2-(3-丁炔基氮二丙啶-3-基)乙酸、1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基乙胺和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，在第三预设条件下进行反应，反应结束后，得到第三反应液；
11、对所述第三反应液进行后处理，纯化后得到所述靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针；
12、
13、在一些实施例中，在所述第一预设反应条件下进行反应时，所述2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶和n-(3-(氨基甲基)吡啶-2-基)-n-甲基甲烷磺酰胺的摩尔比为1：0.8～1.2；
14、在所述第二预设反应条件下进行反应时，所述化合物i、对苯二胺和n,n-二异丙基乙胺的摩尔比为1：3.8～4.2：2.3～2.5；
15、在所述第三预设反应条件下进行反应时，所述化合物ii、2-(3-丁炔基氮二丙啶-3-基)乙酸、1-羟基苯并三唑、n,n-二异丙基乙胺和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的摩尔比为1：2.8～3.2：4.8～5.2：1.8～2.2。
16、在一些实施例中，对第一反应液进行后处理，纯化后得到化合物i，包括：
17、浓缩所述第一反应液；
18、向浓缩后的所述第一反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液，再加入乙酸乙酯进行萃取并合并萃取所得的第一有机相；
19、对所述第一有机相进行干燥，得到化合物i粗品；
20、对所述化合物i粗品进行柱层析提纯，收集洗脱液；
21、对所述洗脱液进行纯化，得到所述化合物i。
22、在一些实施例中，对第二反应液进行后处理，纯化后得到化合物ii，包括：
23、浓缩所述第二反应液；
24、对浓缩后的所述第二反应液进行柱层析提纯，得到所述化合物ii。
25、在一些实施例中，对所述第三反应液进行后处理，纯化后得到靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针，包括：
26、向所述第三反应液中加入纯水，再加入乙酸乙酯进行萃取并合并萃取所得的第二有机相；
27、对所述第二有机相进行干燥和浓缩，得到化合物iii粗品；
28、对所述化合物iii粗品进行柱层析提纯，得到化合物iii即所述靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针。
29、在一些实施例中，所述第一预设反应条件包括反应温度为20℃～25℃，反应时间为8小时～12小时；
30、所述第二预设反应条件包括反应温度为100℃～120℃、反应时间为8小时～12小时、且在氮气保护下进行回流；
31、所述第三预设反应条件包括反应温度为20℃～25℃，反应时间为8小时～12小时。
32、本申请还提供一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的应用，所述的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针在fak抑制剂筛选以及对fak靶标蛋白鉴定方面的应用。
33、本申请的有益效果：本申请提供的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针包括活性基团、光交联基团和生物正交基团。
34、其中，fak抑制剂结构作为活性基团，能够使光亲和探针分子进入fak靶点蛋白的活性中心，以便利用光交联基团进行后续的光亲和反应；
35、光交联基团，即双吖丙啶结构，能够在紫外光的激发作用下，产生自由基，与其邻近的c-h或者c-c键发生插入交联反应，从而对fak靶蛋白进行共价捕获，且该双吖丙啶结构的体积小，避免了光亲和探针分子溶解性差、细胞渗透性差等缺点；
36、生物正交基团，即炔基，能够用于后续偶联生物素或者荧光素，对光亲和探针标记的蛋白质进行分离富集或荧光成像，从而对光亲和探针所标记的信号进行鉴定；
37、基于以上，本申请提供的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针能够实现对fak抑制剂进行筛选以及对fak靶标蛋白进行鉴定的目的。
38、本申请提供的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针制备方法，反应条件温和，工艺简洁，能够快速制备出靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针。
1.一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针，其特征在于，具有如下所示结构：
2.一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的制备方法，用于制备如权利要求1所述的一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的制备方法，其特征在于，
4.根据权利要求2所述的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的制备方法，其特征在于，对第一反应液进行后处理，纯化后得到化合物i，包括：
5.根据权利要求2所述的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的制备方法，其特征在于，对所述第二反应液进行后处理，纯化后得到化合物ii，包括：
6.根据权利要求2所述的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的制备方法，其特征在于，对所述第三反应液进行后处理，纯化后得到靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针，包括：
7.根据权利要求2所述的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的制备方法，其特征在于，所述第一预设反应条件包括反应温度为20℃～25℃，反应时间为8小时～12小时；
8.一种靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针的应用，其特征在于，如权利要求1所述的靶向局部粘着斑激酶的光亲和探针在fak抑制剂筛选以及对fak靶标蛋白鉴定方面的应用。
