本发明属于体外微组织模型的构建，具体涉及一种体外微组织模型、其培养基、构建方法及应用，用于免疫治疗药物响应评估。
背景技术：
1、这里的陈述仅提供与本发明相关的背景技术，而不必然地构成现有技术。
2、临床前模型已成为癌症研究的重要工具，为深入解析肿瘤发生与发展的内在机制，促进抗肿瘤药物由实验向临床前转化，建立能够精准模拟体内肿瘤特性的体外模型显得尤为重要。特别是在肿瘤免疫治疗中，尽管免疫疗法在肿瘤治疗中取得了显著进展，但受限于肿瘤本身的复杂性和异质性，患者对免疫治疗药物的响应率普遍较低，且存在显著的个体差异。因此，在体外构建能够评估病人免疫治疗响应的细胞模型对于提高临床免疫治疗效果、实现患者个体化治疗至关重要。当前，广泛应用的临床前模型主要包括肿瘤异种移植模型、肿瘤细胞系模型以及肿瘤类器官模型等，为肿瘤机制研究和药物开发提供了有力的平台。然而，随着肿瘤相关研究不断深入，发现肿瘤微环境在肿瘤进展、药物响应中的作用非常关键，尤其是在免疫治疗领域，肿瘤微环境成为肿瘤免疫逃逸和治疗抵抗的重要因素。然而，现有的临床前模型在模拟肿瘤细胞与微环境细胞间复杂相互作用、保留肿瘤微环境细胞异质性方面存在局限性，阻碍了对肿瘤免疫治疗药物响应的评估。因此，构建能够真实保留病人原位肿瘤微环境特征的临床前模型，对于推动肿瘤免疫治疗等相关研究具有重要的科学意义与临床价值。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种体外微组织模型、其培养基、构建方法及应用。
2、为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
3、第一方面，本发明提供一种体外微组织模型的培养基，在rpmi-1640培养基基础上添加以下组分：50-200ng/ml egf、50-200ng/ml fgf10、50-200ng/ml igf2和20-100μm y-27632；
4、rpmi-1640培养基中包括质量百分数为8-12％的胎牛血清以及质量百分数为0.5-1.5％的青霉素-链霉素。
5、其中，egf为表皮生长因子；fgf10为人成纤维细胞生长因子10；igf2为胰岛素样生长因子；y-27632结构式为化学式是c14h21n3o。
6、在一些实施例中，所述培养基，包括以下组分：rpmi-1640培养基、10％胎牛血清、1％青霉素-链霉素、50-150ng/ml egf、50-150ng/ml fgf10、50-150ng/ml igf2和20-70μmy-27632。
7、优选的，所述培养基，包括以下组分：rpmi-1640培养基、10％胎牛血清、1％青霉素-链霉素、70-120ng/ml egf、70-120ng/ml fgf10、70-120ng/ml igf2和40-60μm y-27632。
8、进一步优选的，所述培养基，包括以下组分：rpmi-1640培养基、10％胎牛血清、1％青霉素-链霉素、100ng/ml egf、100ng/ml fgf10、100ng/ml igf2和50μm y-27632。
9、在一些实施例中，所述培养基中还包括8-12μg/ml胰岛素和8-12μg/ml氢化可的松。
10、第二方面，本发明提供一种体外微组织模型的构建方法，包括如下步骤：将新鲜肝癌切除组织在体外剪碎后得到的组织片段包埋于基质胶中，采用所述培养基进行培养，即得。
11、在一些实施例中，将新鲜肝癌切除组织剪碎后的组织片段的长为2-3mm。
12、在一些实施例中，培养的时间为为3-10天，根据实验目的可适当延长或缩短培养时间。
13、在一些实施例中，将组织片段包埋于基质胶中的方法为：使用悬滴法将基质胶滴加至低吸附孔板中，随即将剪碎后肿瘤片段放置于胶滴之中，使得肿瘤片段被基质胶完全包裹。
14、第三方面，本发明提供一种体外微组织模型，由所述构建方法构建而得。
15、第四方面，本发明提供所述体外微组织模型在用于临床免疫治疗药物响应评估中的应用。
16、上述本发明的一种或多种实施例取得的有益效果如下：
17、当培养基中添加有100ng/ml egf、100ng/ml fgf10、100ng/ml igf2和50μm y-276322时，能够最好保留地原位组织活性。同时在多组学水平验证培养得到的微组织模型可以高度保留病人原位组织的特征。培养得到的微组织模型可以用于评估患者免疫治疗响应，并能够区分样本免疫治疗响应与不响应特征，该微组织模型的建立为肝癌的个性化临床免疫治疗提供有价值的工具。
1.一种体外微组织模型的培养基，其特征在于：在rpmi-1640培养基基础上添加以下组分：50-200ng/ml egf、50-200ng/ml fgf10、50-200ng/ml igf2和20-100μm y-27632；
2.根据权利要求1所述体外微组织模型的培养基，其特征在于：包括以下组分：rpmi-1640培养基、10％胎牛血清、1％青霉素-链霉素、50-150ng/ml egf、50-150ng/ml fgf10、50-150ng/ml igf2和20-70μm y-27632。
3.根据权利要求1所述体外微组织模型的培养基，其特征在于：包括以下组分：rpmi-1640培养基、10％胎牛血清、1％青霉素-链霉素、70-120ng/ml egf、70-120ng/ml fgf10、70-120ng/ml igf2和40-60μm y-27632；
4.根据权利要求1所述体外微组织模型的培养基，其特征在于：所述培养基中还包括8-12μg/ml胰岛素和8-12μg/ml氢化可的松。
5.一种体外微组织模型的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：将新鲜肝癌切除组织在体外剪碎后得到的组织片段包埋于基质胶中，采用所述培养基进行培养，即得。
6.根据权利要求5所述的体外微组织模型的构建方法，其特征在于：将新鲜肝癌切除组织剪碎后的组织片段的长为2-3mm。
7.根据权利要求5所述的体外微组织模型的构建方法，其特征在于：培养的时间为3-10天。
8.根据权利要求5所述的体外微组织模型的构建方法，其特征在于：将组织片段包埋于基质胶中的方法为：使用悬滴法将基质胶滴加至低吸附孔板中，随即将剪碎后肿瘤片段放置于胶滴之中，使得肿瘤片段被基质胶完全包裹。
9.一种体外微组织模型，其特征在于：由权利要求5-8任一所述构建方法构建而得。
10.权利要求9所述体外微组织模型在用于临床免疫治疗药物响应评估中的应用。
