本发明涉及源自于mage a4抗原的短肽，具体地，涉及新发现的衍生自肿瘤抗原mage a4的短肽，该短肽与mhc分子形成的复合物以及所述短肽与复合物的用途。同时，本发明还涉及与上述短肽或复合物结合的分子，以及这些分子的用途。
背景技术：
1、众所周知，在许多病理条件下，如感染、癌症、自身免疫疾病等，都会有一些特定分子的不适宜表达。因此，这些分子就成了病理或异常状态的“标记”。这些分子不但可以作为疾病诊断的标记物，还可用于产生诊断试剂和/或治疗剂。例如，用癌症的标记物来产生特定的抗体。另外，这些分子还可以有效地激发细胞毒性t淋巴细胞(ctl)的特异性免疫应答，发挥抗肿瘤效能，同时，还可以通过激活的ctl来获得能够与该“标记”结合的t细胞受体(tcr)作为治疗剂。因此，这些分子，在相关疾病的诊断和治疗中发挥着非常重要的作用。
2、对于肿瘤而言，已有很多文献发表过不同的内源性的肿瘤抗原分子。但这并不是相关疾病真正的靶点，因为引起ctl免疫应答反应的并非完整的肿瘤抗原分子，而是来自于抗原的特异性ctl表位(epitope)。一般情况下，肿瘤抗原在细胞内通过蛋白水解作用将其加工成为8-16个氨基酸长度的多肽片段，即ctl表位，进而与内质网腔中的主要组织相容性复合体(mhc，人类的mhc通常称为hla基因或hla复合体)分子结合形成多肽-mhc复合物(peptide-mhc complex,pmhc)，并最终将pmhc递呈到细胞表面供cd8+t细胞表面的tcr识别。虽然相关的内源性肿瘤抗原分子早已有发表，但我们并不知晓被呈递出的具体多肽片段。因此，无论是作为疫苗还是用于产生相关疾病的诊断试剂或是治疗试剂，鉴定出这些被呈递到细胞表面的8-16个氨基酸长度的多肽片段，即ctl表位，是至关重要的。本领域技术人员致力于发现并确定这些被呈递到靶细胞表面的多肽片段。
3、这种被递呈的多肽片段的发现与确定是一个复杂的过程，因为多肽被hla递呈是抗原蛋白的酶解以及多肽片段与hla的相互作用的共同结果。这说明，完整的肿瘤抗原分子并不能为多肽片段的发现与鉴定提供任何信息。很多文献发表了利用电脑模拟的方法，如公开数据库syfpeithi(rammensee,et al.,immunogenetics.1999(50):213-219)和bimas(parker,et al.,j.immunol.1994.152:163)，提供预测算法来鉴定哪个多肽片段可能会被递呈。但这只是一种预测，具有很大的不确定性，因为它并不是真正的胞内处理以及翻译后的修饰过程。肿瘤组织经过处理后，可以利用质谱仪直接鉴定出肿瘤细胞表面被递呈出的多肽片段，虽然这是一个复杂的过程，但这样得到的结果是非常可靠的。同时，质谱仪的灵敏度也足以能够鉴别低浓度的多肽片段以及翻译后的修饰，因此它是发现及确定肿瘤表面多肽片段的理想工具。
4、mage蛋白家族具有与其他mage蛋白的序列紧密匹配的同源区，并且包含在免疫识别中展现为hla/肽复合物的肽。一些mage基因家族蛋白(mage-a至mage-c家族)仅在生殖细胞和癌症中表达；其他(mage-d至mage-h)在正常组织中广泛表达。研究表明，mage-a4蛋白在多种肿瘤类型中均有表达(jia b etal.oncology letters 2019,18(4):3501-3516)(tahara k,etal.cancer 1999,85(6):1234-1240)(tsai jr,etal.lung cancer 2007,56(2):185-192.)(eng kh,etal genes&cancer 2015,6(9-10):399-407.)，包括乳腺癌、肝癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌等。因此，衍生自mage a4的肽，作为上述癌症的靶点，不但可以作为上述疾病诊断的标记物，还可用于产生上述疾病的预防试剂和/或治疗剂，如抗体或t细胞受体。本发明利用质谱仪分析鉴定,首次发现了肿瘤细胞表面被呈递的衍生自肿瘤抗原mage a4的多肽片段。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供了一种新发现的衍生自肿瘤抗原mage a4的短肽，该短肽与mhc分子形成的复合物以及所述短肽与复合物的用途。
2、本发明的第一方面，提供了一种肽，所述肽包含氨基酸序列：kvdelahfllr(seq idno:1)。
3、在另一优选例中，所述肽能够与mhc分子形成复合物。
4、在另一优选例中，所述肽由11或12个氨基酸组成。
5、在另一优选例中，所述肽由11个氨基酸组成。
6、在另一优选例中，所述肽的氨基酸序列为seq id no:1。
7、本发明的第二方面，提供了一种pmhc复合物，所述复合物包含本发明第一方面所述的肽。
8、在另一优选例中，所述pmhc复合物中的肽的氨基酸序列为seq id no:1。
9、在另一优选例中，mhc分子的类型是hla-a*11。
10、在另一优选例中，mhc分子的类型是hla-a*1101。
11、在另一优选例中，所述pmhc复合物为多聚体。
12、在另一优选例中，所述pmhc复合物是可溶的。
13、在另一优选例中，所述pmhc复合物是生物素化的。
14、本发明的第三方面，提供了一种分离的细胞，所述细胞表面负载或递呈本发明第一方面所述的肽。
15、在另一优选例中，所述细胞表面负载或递呈本发明第二方面所述的pmhc复合物。
16、在另一优选例中，所述细胞为dc。
17、在另一优选例中，所述细胞为t2细胞。
18、本发明的第四方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子包含编码本发明第一方面所述肽的核酸序列或其互补序列。
19、本发明的第五方面，提供了一种载体，所述载体含有本发明第四方面所述的核酸分子。
20、本发明的第六方面，提供了一种宿主细胞，所述细胞中含有本发明第五方面所述的载体。
21、本发明的第七方面，提供了一种分子，所述分子能够结合本发明第一方面所述的肽和/或本发明第二方面所述的pmhc复合物。
22、在另一优选例中，所述分子能够特异性结合本发明第一方面所述的肽和/或本发明第二方面所述的pmhc复合物。
23、在另一优选例中，所述分子为t细胞受体。
24、在另一优选例中，所述t细胞受体是可溶的。
25、在另一优选例中，所述分子为抗体或其结合片段。
26、在另一优选例中，所述抗体为单克隆抗体。
27、本发明的第八方面，提供了一种分离的单克隆t细胞，所述细胞是通过利用本发明第一方面所述的肽和/或本发明第二方面所述的pmhc复合物和/或本发明第三方面所述的细胞分离获得。
28、在另一优选例中，所述分离的单克隆t细胞是通过本发明第一方面所述的肽和/或本发明第二方面所述的pmhc复合物和/或本发明第三方面所述的细胞体外刺激筛选获得。
29、在另一优选例中，所述单克隆t细胞特异性结合本发明第二方面所述pmhc复合物。
30、本发明的第九方面，提供了本发明第一方面所述肽、本发明第二方面所述pmhc复合物或本发明第三方面所述的细胞的用途，用于体外激活和/或分离t细胞。
31、本发明的第十方面，提供了本发明第一方面所述肽、本发明第二方面所述pmhc复合物的用途，用于筛选t细胞受体或抗体文库。
32、本发明的第十一方面，提供了本发明第一方面所述的肽、本发明第二方面所述的pmhc复合物、本发明第三方面所述的细胞、本发明第四方面所述的核酸分子、本发明第七方面所述的分子或本发明第八方面所述的t细胞的用途，用于制备预防或治疗癌症的药物。
33、本发明的第十二方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有本发明第一方面所述的肽、本发明第二方面所述的pmhc复合物、本发明第三方面所述的细胞、本发明第七方面所述的分子或本发明第八方面所述的t细胞。
34、在另一优选例中，所述药物组合物为疫苗。
35、在另一优选例中，所述药物组合物中含有药学上可接受的载体。
36、本发明的第十三方面，提供了一种预防或治疗疾病的方法，包括给需要的对象施用适量的本发明第一方面所述肽、本发明第二方面所述pmhc复合物、本发明第三方面所述细胞、本发明第七方面所述分子或本发明第八方面所述t细胞。
37、本发明的第十四方面，提供了一种获得与本发明第二方面所述pmhc复合物结合的分子的方法，包括：
38、(ⅰ)将备选分子与本发明第二方面所述pmhc复合物接触；以及，
39、(ⅱ)筛选出与(ⅰ)中pmhc复合物结合的分子。
40、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
1.一种肽，其特征在于，所述肽包含氨基酸序列：kvdelahfllr(seq id no:1)；
2.一种pmhc复合物，其特征在于，所述复合物包含权利要求1所述的肽。
3.一种分离的细胞，其特征在于，所述细胞表面呈递权利要求2所述的pmhc复合物。
4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包含编码权利要求1所述肽的核酸序列或所述核酸序列的互补序列。
5.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求4所述的核酸分子。
6.一种宿主细胞，其特征在于，所述细胞中含有权利要求5所述的载体。
7.一种t细胞受体，其特征在于，所述t细胞受体能够结合权利要求1所述的肽和/或权利要求2所述的pmhc复合物。
8.一种分离的单克隆t细胞，其特征在于，所述细胞是通过权利要求1所述的肽和/或权利要求2所述的pmhc复合物分离获得。
9.权利要求1所述的肽、权利要求2所述的pmhc复合物的用途，其特征在于，用于筛选t细胞受体或抗体文库。
10.一种药物组合物，所述组合物含有药学上可接受的载体以及权利要求1所述的肽、权利要求2所述的pmhc复合物、权利要求3所述的细胞或权利要求8所述的单克隆t细胞。
