本发明涉及药用真菌提取，尤其涉及一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法。
背景技术：
1、桦褐孔菌(inonotus obliquus(fr.)pil)为桦菌，属于担子菌亚门、秀革孔菌科、褐卧孔菌属。桦褐孔菌活性成分有：多糖、三萜类(桦褐孔菌醇、羊毛甾醇、麦角甾醇、栓菌酸、桦褐孔菌素等)、黄酮类、氨基酸类、木质素类、生物碱类、多酚类、叶酸衍生物、芳香物质(香草酸、丁香酸和γ羟基苯甲酸等)、鞘氨脂类似物、三肽等，具有抗氧化、抗衰老、免疫调节、抗肿瘤、降血糖血脂、肝肾损伤保护、抗病毒、抗炎、抗疲劳等诸多药理活性。
2、目前桦褐孔菌多糖和三萜类提取方法主要包括溶剂浸提法、物理方法辅助提取、酶提取等方法，但目前的提取方法存在高成本、低得率、提取的多糖和三萜类化合物中游离蛋白含量高，会降低其生物活性等问题。因此有必要对桦褐孔菌中多糖和三萜类的提取进行研究，以降低成本，提高得率、纯度和活性。
技术实现思路
1、针对以上不足，本发明提供一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，该方法不但能够同时提取皂苷多糖与三萜类化合物，还能提高得率、纯度和活性。具体技术方案如下：
2、一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，包括以下步骤：
3、(1)将桦褐孔菌进行液体培养后，取菌丝体烘干、粉碎，过50-100目筛，得菌粉，将所述菌粉加入水中浸泡10-20h，冷却，得浸提液；
4、(2)向所述浸提液中加入酶球，于40-50℃下水浴搅拌1-2h后，离心，收集上清液，得第一提取液；并向收集的沉淀物中加水，于300-400w下超声处理10-20次，每次间隔5-10s，离心，收集上清液，得第二提取液；
5、(3)将所述第一提取液和第二提取液合并，减压浓缩，得目标产物。
6、进一步地，所述步骤(1)中，桦褐孔菌液体培养方法为：将活化菌种接种到液体培养基中，于25-28℃下振荡培养5-10天，即得。
7、进一步地，所述活化菌种的接种量为所述液体培养基重量的0.1-0.3％；所述液体培养基包括如下重量份数的原料：玉米粉5-15份、蛋白胨0.1-0.5份、黄皮提取物0.01-0.05份、硫酸锰0.02-0.04份、硫酸锌0.001-0.003份、硫酸亚铁0.003-0.005份、硫酸铜0.001-0.002份、磷酸二氢钾0.05-0.08份、蔗糖脂肪酸酯0.05-0.08份、木质纤维素0.1-0.5份和水1000-1500份。
8、进一步地，所述黄皮提取物是：将黄皮果果皮剪碎后置于索氏提取器中，加入10-20重量倍的石油醚进行提取，过滤，将滤液旋蒸浓缩，即得所述黄皮提取物。
9、进一步地，所述步骤(1)中，菌粉与水的重量比为1:100-200，水的温度为70-80℃。
10、进一步地，所述步骤(2)中，酶球的制备方法为：将壳聚糖和多酚类化合物加入质量浓度为0.5-1.5％的酸溶液中，制成壳聚糖重量含量为2-6％、多酚类化合物含量为0.02-0.1mol/l的溶液；将所述溶液滴加到凝固液中固化成小球；将几丁质酶和纤维素酶溶解后，加入所述小球震荡1-2h，干燥，即得所述酶球。
11、进一步地，所述多酚类化合物为单宁或茶多酚。
12、进一步地，所述凝固液为含氢氧化钠的5-20％乙醇溶液，所述氢氧化钠的浓度为200-250g/l。
13、进一步地，所述几丁质酶、纤维素酶、小球的重量比为(0.01-0.08):(0.01-0.05):1。
14、进一步地，所述步骤(3)中，减压浓缩是：浓缩至相对密度为1.08-1.35的膏体。
15、与现有技术相比，本发明的有益效果是：
16、1.本发明桦褐孔菌液体培养可刺激菌体产生更多的多糖和三萜类化合物，提高得率。其中液体培养基中的黄皮提取物可刺激三萜类物质产生，提高菌体中三萜类物质含量，而蔗糖脂肪酸酯和木质纤维素可刺激多糖的产生，提高菌体中多糖含量。
17、2.本发明的酶解提取中采用酶球进行酶解，酶球中的几丁质酶和纤维素酶可使细胞壁溶解，细胞内的多糖和三萜类物质能大量溶出，提高了得率；同时，酶球中的酚类化合物可使提取液中的蛋白发生沉淀被分离出去，提高了提取物的纯度，进而提高了活性；此外，本发明酶球可以重复使用，节约了酶的用量，降低了提取成本。
18、3.本发明采用先酶球酶解处理，再用超声处理方法进行提取，可提高三萜类物质得率。
19、4.本发明可使提取到的多糖不发生降解，进而提高了多糖的活性。
1.一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，桦褐孔菌液体培养方法为：将活化菌种接种到液体培养基中，于25-28℃下振荡培养5-10天，即得。
3.根据权利要求2所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述活化菌种的接种量为所述液体培养基重量的0.1-0.3％；所述液体培养基包括如下重量份数的原料：玉米粉5-15份、蛋白胨0.1-0.5份、黄皮提取物0.01-0.05份、硫酸锰0.02-0.04份、硫酸锌0.001-0.003份、硫酸亚铁0.003-0.005份、硫酸铜0.001-0.002份、磷酸二氢钾0.05-0.08份、蔗糖脂肪酸酯0.05-0.08份、木质纤维素0.1-0.5份和水1000-1500份。
4.根据权利要求3所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述黄皮提取物是：将黄皮果果皮剪碎后置于索氏提取器中，加入10-20重量倍的石油醚进行提取，过滤，将滤液旋蒸浓缩，即得所述黄皮提取物。
5.根据权利要求1所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，菌粉与水的重量比为1:100-200，水的温度为70-80℃。
6.根据权利要求1所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，酶球的制备方法为：将壳聚糖和多酚类化合物加入质量浓度为0.5-1.5％的酸溶液中，制成壳聚糖重量含量为2-6％、多酚类化合物含量为0.02-0.1mol/l的溶液；将所述溶液滴加到凝固液中固化成小球；将几丁质酶和纤维素酶溶解后，加入所述小球震荡1-2h，干燥，即得所述酶球。
7.根据权利要求6所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述多酚类化合物为单宁或茶多酚。
8.根据权利要求6所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述凝固液为含氢氧化钠的5-20％乙醇溶液，所述氢氧化钠的浓度为200-250g/l。
9.根据权利要求6所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述几丁质酶、纤维素酶、小球的重量比为(0.01-0.08):(0.01-0.05):1。
10.根据权利要求1所述的一种酶法提取桦褐孔菌中皂苷多糖与三萜类化合物的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，减压浓缩是：浓缩至相对密度为1.08-1.35的膏体。
